一、细胞简介

细胞简介

C57BL/6植入c2J囊胚时，毛色嵌合体的得率高；而植入FVB囊胚产生的嵌合体数量少。ES细胞可以进入FVB/NJ（FVB）和同源突变品系C57BL/6-Tyrc-2J（c2J）这两个供体宿主囊胚的生殖系。

细胞名称

C57BL/6小鼠胚胎干细胞

细胞货号

HBCC24674

来源

C57BL/6小鼠；雄性；胚胎

细胞形态

球形克隆

细胞类型

正常细胞

生长特性

贴壁生长

培养条件

1、DMEM培养基（货号：HBCC16563）；

2、优质胎牛血清+15%（货号：HBCC11405）；

3、GlutaMAX-1谷氨酰胺+1%（货号：HBCC16091）；

4、MEM NEAA非必需氨基酸+1%（货号：HBCC16092）；

5、Sodium Pyruvate丙酮酸钠+1%（货号：HBCC16093）；

6、β-巯基乙醇+0.5 mL（1000X)（货号：HBCC16101）；

7、LIF+5μg（10ng/mL）（货号：HBCC16121）；

8、双抗，1%（货号：HBCC15487）。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

注意：

1、建议使用CF-1  MEF作为饲养层细胞。

2、在铺胚胎干细胞前，需对MEF进行处理，具体处理步骤见下文丝裂霉素灭活MEF。

3、该细胞建议冻存干冰发货，不适合长时间活细胞运输，会影响细胞活力。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL基础培养基（含10%FBS）的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、尽量吸干净T25瓶原培养基；
2、用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，吸走润洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的基础培养基终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

不同品牌胰酶消化时间差别较大，可根据细胞形态判断消化进程

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：完全培养液 60%，FBS 30%，DMSO 10%现用现配。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

细胞培养清除试剂