一、细胞简介

细胞简介

MES-SA是一种上皮细胞系，从一位56岁的白人女性子宫肉瘤患者的子宫中分离出来。该细胞系由从子宫切除术获得的外科肿瘤标本中建立了MES-SA细胞株。这个肿瘤是低分化的子宫肉瘤。开始，细胞生长于软琼脂，后来转移到多孔板。超微结构研究和粘液素染色缺失都支持这株细胞的非表皮细胞起源。细胞对数种化疗药剂敏感，包括：链霉素，放线菌素D，丝裂霉素C，紫杉酚和争光霉素。细胞对长春碱, 氮烯唑胺, 顺氯氨铂, 左旋溶肉瘤素, 长春新碱, 甲氨蝶呤和表鬼臼毒素吡喃葡糖苷有抗性。从链霉素存在下生长的MES-SA细胞株中筛选建立多抗药性细胞株MES-SA/Dx5。细胞入库冻存保种精准代数为P63代。

细胞名称

MES-SA 人子宫肉瘤细胞

细胞别称

MES-SA Human uterine sarcoma cells

细胞货号

HBCC27142

来源

白人 女性 器官：子宫 疾病：子宫肉瘤

细胞形态

成纤维细胞样

生长特性

贴壁细胞

培养条件

准备McCOY'S 5A培养基（货号：HBCC16573）；

优质胎牛血清10%（货号：HBCC11405）；

双抗1%（货号：HBCC15487）。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。细胞消化时间2-3min。传代比例1:2，传代周期2-3天

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、尽量吸干净T25瓶原培养基；
2、用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，吸走润洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml完培终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心3-5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

不同品牌胰酶消化时间差别较大，可根据细胞形态判断消化进程

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

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