一、细胞简介

细胞简介

EL-4-B5细胞是小鼠EL4胸腺瘤的亚克隆，它是一种溴脱氧尿苷抗性突变体，可以用作产生人单克隆抗体的B细胞的饲养层。用甲烷磺酸乙酯对产生IL-2的EL-4小鼠胸腺瘤细胞进行诱变产生了T细胞杂交瘤的融合伴侣，然后发现胸苷激酶缺陷和瓦巴因抗性克隆EL-4 BurOUr 6.1，该细胞可以通过细胞接触激活小鼠和人B细胞。亚克隆后获得EL-4-B5细胞，该细胞强烈激活B细胞。EL4-B5与B细胞一起生长，以通过直接细胞接触激活B细胞，从而诱导增殖、分化和抗体分泌。EL-4-B5细胞系提供了一种从用荧光VLP选择的单个抗原特异性B细胞克隆产生重组人mAb的方法，并且可以用于产生许多其他病毒的人mAb，这些病毒的蛋白质可以自组装成VLP。

细胞名称

EL-4-B5 小鼠胸腺淋巴瘤细胞

细胞货号

HBCC17044

来源

小鼠；胸腺

细胞形态

淋巴母细胞样

细胞类型

肿瘤细胞

生长特性

半贴壁半悬浮

培养条件

1640培养基；优质胎牛血清+10%；双抗+1%。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中；
2、用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，连同PBS一同回收离心管中；
3、将培养瓶中悬浮的细胞收集完后，使用细胞刮刀收集瓶内贴壁细胞；
4、将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和收集到的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清；
5、补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中；
6、添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力；

注意事项

该细胞不用胰酶消化，使用细胞刮刀

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配（推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷）。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存；

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。