一、细胞简介

细胞描述

该细胞是Arvanitakis L等人于1995年人胸膜积液分离获得的 B淋巴细胞。该细胞复苏后需要一到两周左右才恢复正常生长。

细胞名称

BC-3 人淋巴瘤细胞

细胞别称

BC-3

细胞货号

HBCC27178

来源

人 男性 胸膜积液

细胞形态

淋巴母细胞

生长特性

悬浮生长

培养条件

准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清20%；双抗1%。

注意事项：该细胞复苏后成活率较低，会出现大量死细胞碎片，培养一到两周后有所好转。运输途中会出现死细胞和细胞碎片，收到邮寄的活细胞的用户若发现培养物内有黑色颗粒物及细胞碎片，此为正常现象。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

传代周期：保持活细胞密度在5x10^5~ 2x10^6 /ml之间，不可过密或过稀 换液频率：每周2-3次

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法（悬浮细胞）

传代比例

1:2（不同细胞情况具体对待）

传代方法

1、当细胞量达到 8-10×10⁵cell/ml 时，可进行传代；

2、在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，收集瓶内的细胞悬液至离心管中；

3、1000rpm 离心 5min，离心完成后，弃上清；

4、准备两个新的T-25 培养瓶。向细胞沉淀加入完全培养基重悬，调整细胞密度为2-4×10⁵cell/ml，均匀铺于2个新的培养瓶中，每瓶约6-8ml；

5、水平放置培养瓶，震荡混匀后，将培养瓶置于 37℃，5%CO₂ 培养箱中静置培养；

注意事项

注意收集悬浮的细胞

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

冻存规格

建议每瓶T25瓶冻存1支。

冻存方法

1、待细胞生长状态良好时，即可进行细胞冻存；

2、收集细胞悬液，计数；

3、1000rpm 离心 5min，离心完成后，弃上清；

4、加入细胞冻存液重悬细胞沉淀，调整细胞密度为2×10⁶ cell/ml，轻轻混匀后，将细胞悬液加入冻存管，1ml/支。

5、将冻存管转入填充满异丙醇的程序降温盒中，之后转入-80℃冰箱中过夜降温；

6、次日取出降温完成的序降温盒中的冻存管，尽快转入液氮罐中保存；

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。