一、细胞简介

细胞简介

与原始的随机交配3T3和近交系BALB/c 3T3建株方法一样，NIH/3T3，是从NIH Swiss小鼠胚胎培养物中建立的高度接触抑制的连续细胞株。为了培育在形态学特征上更适合于进行转化分析的亚株，建立的NIH/3T3细胞株又进行了五轮以上亚克隆。这株细胞对DNA转化及转染研究十分有用。检测表明肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。

细胞名称

NIH/3T3 小鼠胚胎成纤维细胞

细胞别称

NIH/3T3; NIH-3T3; NIH3T3; 3T3; 3T3NIH; 3T3-Swiss; Swiss-3T3; Swiss/3T3; Swiss 3T3; Swiss3T3

细胞货号

HBCC10374

来源

NIH Swiss品系；胚胎

细胞形态

成纤维细胞样

生长特性

贴壁生长

鉴定报告

提供种属鉴定

培养条件

1、DMEM培养基（货号：HBCC16563）；

2、小牛血清+10%（货号：HBCC11603）；

3、MEM NEAA非必需氨基酸+1%（货号：HBCC16092）；

4、Sodium Pyruvate丙酮酸钠+1%（货号：HBCC16093）；

5、GlutaMAX-1谷氨酰胺+1%（货号：HBCC16091）；

6、P/S+1%（货号：HBCC15487）；

切勿使细胞生长过密，每周至少传代2次，保证细胞密度不超过80%

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4ml常规培养基（含10%FBS）的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的T25培养瓶（或6cm皿）中37℃培养箱培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、尽量吸干净T25瓶原培养基；
2、用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1次，吸走润洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化2min左右（不同胰酶，消化时间不同，要根据细胞脱落情况，在进行终止消化）；
5、轻轻侧拍T25培养瓶镜下观察，消化到细胞脱落在胰酶当中后，加入2-3ml含10%FBS的常规培养基终止消化；
6、1000rpm离心5min，收集到15ml离心管中加2ml该细胞完全培养基，重悬细胞时，在离心管中轻轻吹打，把细胞混匀；
7、按1:2分配到新的T25培养瓶中，添加4-5ml完全培养基放回37℃培养箱；

注意事项

不同品牌胰酶差异大，请注意消化时间

四、细胞冻存方法

冻存液

推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml（本公司是1个T25培养瓶长满冻存1支冻存管）；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

细胞培养清除试剂