一、细胞简介

细胞简介

该细胞系是由A.F. Gazdar、H.K. Oie、J.D. Minna及其同事从一名58岁白人男性吸烟肺癌患者治疗前获得的。 这是一种亚三倍体人类细胞系，其模态染色体数出现在 68% 的计数细胞中。多倍体细胞发生率为 3.0%；所有细胞共有 11 条标记染色体，其中两条是配对的。标记包括：der(6)(q13)、t(7p17q)、del(10)(p11.23)、配对 der(7)t(7;?17)(p22;?q21.1) 和 der( 16)t(16;?)(q24;?) 和其他六个；正常 Y、N13、N15 和 N16 不存在；X染色体大多是成对的。这些细胞携带 TP53 基因密码子 191 的突变。细胞不能合成肽神经调节蛋白 B (NMB) 或胃泌素释放肽 (GRP)。细胞对角蛋白和波形蛋白染色呈阳性，但对神经丝三联体蛋白呈阴性。

细胞名称

NCI-H522 人非小细胞肺癌腺癌细胞

细胞货号

HBCC17872

来源

58岁；白人；男性；肺癌

细胞形态

上皮样

细胞类型

肿瘤细胞

生长特性

贴壁生长、松散贴壁

培养条件

1640培养基；优质胎牛血清+10%；双抗+1%。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、尽量吸干净T25瓶原培养基；
2、用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，吸走润洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml完培终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心3-5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

不同品牌胰酶消化时间差别较大，可根据细胞形态判断消化进程

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配（推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷）。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。