一、细胞简介

细胞简介

293T/17细胞株是293T (293tsA1609neo)细胞株的衍生株。 293T 是293细胞株插入了SV40 T-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株。 293T细胞进行克隆，检测pBND和pZAP载体，得到一株能生成高滴度感染逆转录病毒的衍生株，293T/17。 细胞持续表达猿病毒40(SV40)大T抗原，而因其高转染能力筛选到17号克隆。 293T/17细胞用pCRIPenv-和pCRIPgag-2载体转染得到ANJOU 65 细胞株。 ANJOU 65细胞再用pCRIPgag-2 和 pGPT2E载体转染得到亲宅性外壳表达细胞株BOSC 23。ANJOU 65细胞用携带gpt抗性基因的pCRIPAMgag载体转染得到Bing 双向性表达包装细胞株。

细胞名称

293T/17 人胚肾细胞

细胞别称

HEK-293T/17; HEK 293T/17; 293T/17

细胞货号

HBCC17742

来源

人；胚胎肾

细胞形态

上皮细胞样

生长特性

贴壁生长（贴壁不牢）

培养条件

DMEM培养基；优质胎牛血清+10%；双抗+1%。建议在完全培养基中添加（L-谷氨酰胺（2mM）+1%；NEAA+1%）

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法（贴壁不牢）

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；
2、PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中，注意收集PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml完培终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心3-5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

注意：

1.该细胞贴壁能力较弱，培养时可酌情使用预铺0.2%明胶的培养瓶/培养皿。在运输过程中，细胞会漂浮聚团生长，收到细胞时同时收集悬浮细胞和贴壁细胞离心重悬后传代培养。

2.如果发生293T/17细胞不贴壁，漂浮在培养基中的现象，可以酌情在培养基中添加（L-谷氨酰胺（2mM）1%；NEAA 1% ）以便正确缓冲培养基。促使悬浮细胞更好的存活以及细胞更容易贴壁。

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配（推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷）。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。