一、细胞简介

细胞简介

HIEC-6是从健康供体的小肠中分离的贴壁细胞系。非恶性和非致瘤性，该细胞系模拟正常胃肠(GI)功能，经常用作结肠直肠癌研究中的对照。该细胞系可用于模拟胃肠(GI)屏障。它可用于研究正常肠细胞增殖、存活、干细胞和导致谱系特异性分化的分子机制。还可以研究激素、生长因子、细胞外基质分子、药物代谢和致癌因素对肠功能的影响。这是一种非持续生长的人肠上皮细胞系，表达上皮细胞角蛋白和肠隐窝细胞的功能标记。它们表现出典型的肠隐窝细胞增殖和未分化特征。

细胞名称

HIEC-6 人正常肠上皮细胞

细胞别称

HIEC-6

细胞货号

HBCC16822

来源

17-19  女性  小肠

细胞形态

上皮细胞样

生长特性

贴壁细胞

培养条件

准备Opti-MEMTMI 减少血清培养基(Gibco目录号31985070)；20 mM HEPES，10 mM GlutaMAX   10 ng/mL EGF，优质胎牛血清，4%；双抗1%。

注意：由于有限的稳定性，表皮生长因子(EGF)应该在播种、进行液体添加和完全液体更换之前添加到新鲜的培养基的等分试样中。添加了EGF的培养基最佳使用期限是10天, 10 ug/mL EGF Stock: use 1 uL/1 mL culture medium

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。传代比例1：2，传代周期：2-3天。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、尽量吸干净T25瓶原培养基；
2、用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，吸走润洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml完培终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心3-5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

不同品牌胰酶消化时间差别较大，可根据细胞形态判断消化进程

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。