一、细胞简介

细胞简介

THLE-2 是从供体左叶分离的上皮细胞，TTHLE-2 ( ATCC CRL-2706和 THLE-3 ( ATCC CRL-11233 ) 细胞系是通过感染 SV40 大 T 抗原从原代正常肝细胞中获得的。[RF84749] 该病毒是通过引入含有将SV40 T抗原的Bgl I-Hpa I片段导入两性包装细胞系PA317。[RF84750] THLE-2 和 THLE-3 细胞表达正常成人肝上皮细胞的表型特征。当注射到无胸腺裸鼠体内时，它们不会产生肿瘤，具有接近二倍体的核型，并且不表达甲胎蛋白。[RF84750] THLE-2 和 THLE-3 细胞将苯并[a]芘、N-亚硝基二甲胺和黄曲霉毒素 B1 代谢为其最终致癌代谢物，这些代谢物会加合 DNA，这表明功能性细胞色素 P450 途径。[RF84750] 其他参与化学致癌物代谢的酶，例如环氧化物水解酶、NADPH 细胞色素 P450 还原酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽 S-转移酶和谷胱甘肽过氧化物酶也被 THLE 细胞保留。

细胞名称

THLE-2 人正常肝细胞

细胞别称

THLE-2；THLE2; Transformed Human Liver Epithelial-2

细胞货号

HBCC16595

来源

肝; 左叶

细胞形态

上皮细胞样

生长特性

贴壁生长

培养条件

准备BEGM kit培养基  (Lonza/Clonetics)备注：培养基包含（A+B），ATCC 不使用 BEGM 试剂盒提供的 GA（庆大霉素-两性霉素 B 混合物） 和肾上腺素（Epinephrine），另向其中添加额外的 5 ng/mL EGF、70 ng/mL 磷酸乙醇胺和 10% FBS。可根据实验要求添加P/S双抗，1%。

A： BEBM 基础培养基 500ML      B:  细胞生长添加剂 一套（包含下列试剂）

● BPE, 2.0 ml ● Hydrocortisone, 0.5 ml  ● hEGF, 0.5 ml

● Epinephrine, 0.5ml  ● Insulin,0.5 ml   ● Transferrin, 0.5 ml

● Triiodothyronine, 0.5 ml ● Retinoic Acid, 0.5 ml ● GA, 0.5ml

注意： The flasks used should be precoated with a mixture of 0.01 mg/mL fibronectin, 0.03 mg/mL bovine collagen type I and 0.01 mg/mL bovine serum albumin dissolved in BEBM medium.

该细胞生长缓慢，培养周期2-3周左右。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、尽量吸干净T25瓶原培养基；
2、用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，吸走润洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml完培终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心3-5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

不同品牌胰酶消化时间差别较大，可根据细胞形态判断消化进程

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配（推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷）。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

细胞培养清除试剂