一、细胞简介

细胞简介

该细胞系是1984年由Friedman等建立的；在裸鼠体内可以成瘤。该细胞系中纤维原蛋白、谷氨酰胺合成酶、神经元特有烯醇酶阳性，但神经胶质纤维蛋白、S-100蛋白阴性；UJ13A单克隆抗体检测该细胞神经外胚层抗原阳性；c-myc癌基因高表达。STR信息：Amelogenin：X，Y；CSF1PO：10，11；D13S317：11，13；D16S539：12，14；D18S51：12，17；D19S433：13；D21S11：30，31；D2S1338：17；D3S1358：16，18；D5S818：11，12；D7S820：9，13；D8S1179：14；FGA：19，23；TH01：6，9.3；TPOX：8，11；vWA：17，18；

细胞名称

D341 Med 人脑髓母细胞瘤细胞

细胞别称

D-341 Med; D-341 MED; D-341 Med-C; D-341Med; D-341MED; D341_Med; D341Med; D341MED; D341MD; D-341; D341; Med 341; H341

细胞货号

HBCC14059

来源

3岁5月龄；男性；脑；白人

细胞形态

圆形 髓母细胞样

生长特性

悬浮生长

培养条件

MEM培养基；优质胎牛血清+10-20%；1% NEAA；1mM丙酮酸钠；双抗+1%。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法（悬浮细胞）

传代比例

1:2（不同细胞情况具体对待）

传代方法

1、当细胞量达到 8-10×10⁵cell/ml 时，可进行传代；

2、在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，收集瓶内的细胞悬液至离心管中；

3、1000rpm 离心 5min，离心完成后，弃上清；

4、准备两个新的T-25 培养瓶。向细胞沉淀加入完全培养基重悬，调整细胞密度为2-4×10⁵cell/ml，均匀铺于2个新的培养瓶中，每瓶约6-8ml；

5、水平放置培养瓶，震荡混匀后，将培养瓶置于 37℃，5%CO₂ 培养箱中静置培养；

注意事项

注意收集悬浮的细胞

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

冻存规格

建议每瓶T25瓶冻存1支。

冻存方法

1、待细胞生长状态良好时，即可进行细胞冻存；

2、收集细胞悬液，计数；

3、1000rpm 离心 5min，离心完成后，弃上清；

4、加入细胞冻存液重悬细胞沉淀，调整细胞密度为2×10⁶ cell/ml，轻轻混匀后，将细胞悬液加入冻存管，1ml/支。

5、将冻存管转入填充满异丙醇的程序降温盒中，之后转入-80℃冰箱中过夜降温；

6、次日取出降温完成的序降温盒中的冻存管，尽快转入液氮罐中保存；

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。