一、细胞简介

细胞简介

MRC-5细胞系来自14周龄（14FW）男性胎儿的正常肺组织，该细胞老化前能传代42到46次群体倍增。它是正常二倍体细胞系，46，XY核型。模式染色体数为46，概率为70%。他是一株有限细胞系（Finite cell line）。

细胞名称

MRC-5 人胚肺成纤维细胞

细胞别称

MRC5; MRC 5; MRCV; MRC-V; Medical Research Council cell strain-5

细胞货号

HBCC10616

来源

14FW；胚胎；肺

细胞形态

成纤维细胞样

生长特性

贴壁生长

培养条件

DMEM 基础培养基 89%（货号：HBCC16563）；优质胎牛血清10%（货号：HBCC11405）；

P/S青霉素-链霉素 1%（货号：HBCC15487）。

备注：该细胞对DMSO敏感，故复苏时应离心去处冷冻剂后再培养。该细胞为有限传代细胞系，客户收到之后可以稳定传代8-10代左右，具体的传代次数根据客户使用的血清品质，培养基品牌和细胞培养环境以及个人操作手法来决定。之后细胞增殖缓慢。建议少量扩增并尽快用于实验。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4ml常规培养基（含10%FBS）的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的T25培养瓶（或6cm皿）中37℃培养箱培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、尽量吸干净T25瓶原培养基；
2、用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1次，吸走润洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化2min左右（不同胰酶，消化时间不同，要根据细胞脱落情况，在进行终止消化）；
5、轻轻侧拍T25培养瓶镜下观察，消化到细胞脱落在胰酶当中后，加入2-3ml含10%FBS的常规培养基终止消化；
6、1000rpm离心5min，收集到15ml离心管中加2ml该细胞完全培养基，重悬细胞时，在离心管中轻轻吹打，把细胞混匀；
7、按1:2分配到新的T25培养瓶中，添加4-5ml完全培养基放回37℃培养箱；

注意事项

不同品牌胰酶差异大，请注意消化时间

四、细胞冻存方法

冻存液

推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml（本公司是1个T25培养瓶长满冻存1支冻存管）；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

细胞培养清除试剂