一、细胞简介

细胞简介

该细胞系由PontenJ等建立，源于恶性神经胶质瘤。裸鼠皮下接种可成瘤。Problematic cell line: Misidentified. This cell line is not the original glioblastoma cell line established in 1968 at the University of Uppsala. As described in PubMed=27582061 it is most probably also a glioblastoma cell line but whose origin is unknow. See U-87MG Uppsala (Cellosaurus=CVCL_GP63) for the original U-87MG cell line.

细胞名称

U87MG 人脑星形胶质母细胞瘤

细胞别称

U-87MG; U-87 MG; U87 MG; U-87-MG; U87-MG; U87MG; U-87; U87; 87 MG; 87MG

细胞货号

HBCC10592

来源

神经胶质瘤

细胞形态

上皮细胞样

生长特性

贴壁生长、贴壁不牢

鉴定报告

提供STR鉴定

培养条件

DMEM培养基（货号：HBCC16563）；优质胎牛血清+10%（货号：HBCC11405）；

双抗+1%（货号：HBCC15487）；

注意事项：

(1) U-87 MG细胞密度过高会聚团，80%即可传代。细胞贴壁不好，温度低时细胞容易收缩脱落漂浮,生长过程中会出现悬浮细胞，在换液和传代过程中需要离心回收悬浮的细胞,丢弃悬浮的细胞会使细胞的密度变低.

(2) 由于细胞贴壁性不佳，建议使用Corning CellBIND (3289) 培养瓶。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL基础培养基（含10%FBS）的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；
2、PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中，注意收集PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml基础培养基（含10%FBS）终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

培养细胞的过程中细胞会发生堆叠和松散贴壁的细胞团这是正常的。需要 2-3 天对细胞进行一次换液以保证细胞的正常生长。该细胞贴壁较慢，复苏细胞后 48h 内尽量不要移动细胞让细胞达到最佳的贴壁状态。生长过程中会悬浮细胞出现，在换液和传代过程中需要离心回收悬浮的细胞。丢弃悬浮的细胞会使细胞的密度变低，这个细胞在培养过程中不会达到 100%的融合。细胞生长过密会引起贴壁的细胞变成悬浮的状态。明胶或多聚赖氨酸包被的培养瓶可以使细胞更好的贴壁。

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配（推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷）。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

细胞培养清除试剂