一、细胞简介

细胞简介

该细胞是从一名69岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立的。该细胞保留了多个分化乳腺上皮的特性，包括：能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构（domes）；该细胞表达WNT7B癌基因；TNF-α可以抑制MCF-7细胞的生长；抗雌激素处理能调节细胞胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）的分泌。

细胞名称

MCF-7 人乳腺癌细胞

细胞别称

MCF 7; MCF.7; MCF7; Michigan Cancer Foundation-7; ssMCF-7; ssMCF7; MCF7/WT; MCF7-CTRL; IBMF-7

细胞货号

HBCC10486

来源

69岁；白人；女性；胸腔积液

细胞形态

上皮样细胞

生长特性

贴壁生长

鉴定报告

提供STR鉴定

培养条件

DMEM培养基（货号：HBCC16563）；优质胎牛血清+10%（货号：HBCC11405）；添加0.01mg/ml 胰岛素（货号：HBCC17178）;双抗+1%（货号：HBCC15487）。

注意事项：

a. mcf-7 细胞一般情况下是生长缓慢的细胞系，前期呈岛状生长，随着细胞生长，细胞会逐步变成扁平单层细胞。通常需要6-12天才能达到80%生长密度，如果生长速度比正常情况还要缓慢，可能需要换另外批次的血清，把血清浓度提高到20%也有助于改善细胞生长情况。

b. mcf-7细胞在复苏和传代后，会在培养基中观察到成团的细胞漂浮物，对于这个细胞来说这是正常的情况，在复苏和传代后前三天可以静置细胞不做处理，三天后贴壁情况会有所改善，但悬浮的细胞团仍会出现，这些悬浮的细胞是活细胞在换液和传代时需要离心回收，这些悬浮细胞团可以通过使用移液器（5mL或者更小）来吹散，重新打入到贴壁细胞培养瓶中。丢弃这些悬浮细胞会使细胞密度变低，细胞生长缓慢。

c. 使用0.25% (w/v) Trypsin - 0.53 mM EDTA 消化细胞。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL基础培养基（含10%FBS）的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、尽量吸干净T25瓶原培养基；
2、用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，吸走润洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的基础培养基终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

使用0.25% (w/v) Trypsin - 0.53 mM EDTA 消化细胞。

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配（推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷）。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

细胞培养清除试剂