一、细胞简介

细胞简介

NCI-H660 是一种上皮神经内分泌细胞，是从一名 63 岁白人癌症男性患者的前列腺中分离出来的。该细胞系由 AF Gazdar 和 JD Minna 保藏，可用于癌症研究。虽然 NCI-H660 具有小细胞癌的外观和许多特性，但也存在差异。NCI-H660 表达升高水平的左旋多巴羧化酶和铃蟾肽样免疫反应性。这些细胞表达功能性心房钠尿肽 (ANP) 受体，但添加 ANP 不会对细胞的生长模式产生可检测到的变化。

细胞名称

NCI-H660 人神经内分泌前列腺癌细胞

细胞别称

H660; H-660; NCIH660; NCI660

细胞货号

HBCC10386

来源

63岁；白人；男性；淋巴结

细胞形态

圆形细胞

生长特性

贴壁、悬浮混合生长

培养条件

1640培养基；优质胎牛血清10%；GlutaMAX-1谷氨酰胺+1%；ITS+1%；氢化可的松+10nM；雌二醇+10nM；双抗1%。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法（混合生长细胞，注意收集细胞）

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；
2、PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中，注意收集PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml完培终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心3-5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

不同品牌胰酶消化时间差别较大，可根据细胞形态判断消化进程

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配（推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷）。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。