一、细胞简介

细胞简介

NCI-H716细胞是1984年从一名33岁白人男性结肠腺癌患者的腹水转移病灶中分离出的，患者取样前经过5-氟尿嘧啶治疗。NCI-H716细胞含有多巴脱羧酶，与其他结直肠细胞系不同，含有内分泌分泌特征的细胞质致密核心颗粒。NCI-H716细胞不表达TAG-72或CA19-9抗原，也不产生癌胚抗原（CEA）。

细胞名称

NCI-H716 人结直肠腺癌细胞

细胞别称

NCI H716; H716; H-716; NCIH716

细胞货号

HBCC10189

来源

33岁；白人；男性；腹水

细胞形态

上皮细胞样

生长特性

悬浮生长

鉴定报告

提供STR鉴定

培养条件

1640培养基（货号：HBCC16564）；特级胎牛血清+10%（货号：HBCC11405）；

双抗+1%（货号：HBCC15487）。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL基础培养基（含10%FBS）的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法（悬浮细胞）

传代比例

1:2（不同细胞情况具体对待）

传代方法

1、当细胞量达到 8-10×10⁵cell/ml 时，可进行传代；

2、在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，收集瓶内的细胞悬液至离心管中；

3、1000rpm 离心 5min，离心完成后，弃上清；

4、准备两个新的T-25 培养瓶。向细胞沉淀加入完全培养基重悬，调整细胞密度为2-4×10⁵cell/ml，均匀铺于2个新的培养瓶中，每瓶约6-8ml；

5、水平放置培养瓶，震荡混匀后，将培养瓶置于 37℃，5%CO₂ 培养箱中静置培养；

注意事项

注意收集悬浮的细胞

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配（推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷）。

冻存规格

建议每瓶T25瓶冻存1支。

冻存方法

1、待细胞生长状态良好时，即可进行细胞冻存；

2、收集细胞悬液，计数；

3、1000rpm 离心 5min，离心完成后，弃上清；

4、加入细胞冻存液重悬细胞沉淀，调整细胞密度为2×10⁶ cell/ml，轻轻混匀后，将细胞悬液加入冻存管，1ml/支。

5、将冻存管转入填充满异丙醇的程序降温盒中，之后转入-80℃冰箱中过夜降温；

6、次日取出降温完成的序降温盒中的冻存管，尽快转入液氮罐中保存；

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

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