一、细胞简介

细胞简介

PY8119 是一种间充质样细胞系，于 2004 年从患有腺癌的成年雌性小鼠的乳腺中分离出来。该细胞系是研究恶性乳腺肿瘤发生和转移的多步进展的模型，也可用作三阴性乳腺癌的临床前小鼠模型。PY8119细胞系代表源自MMTV-PyMY（小鼠乳腺肿瘤病毒启动子驱动的多瘤中T抗原）转基因C57BL/6雌性小鼠中自发产生的乳腺腺癌的间充质肿瘤细胞。该细胞系携带多瘤病毒中T癌基因，但其表达下调。Py8119 细胞在某种程度上呈纺锤形，在培养中不会形成离散的集落。该细胞系非常强大，可在体内形成侵袭性间质肿瘤。原位注射时肿瘤不会转移，但尾静脉注射会导致多个部位出现肿瘤，包括肺、肝和骨。Py8119 表达间充质标记物 N-钙粘蛋白、波形蛋白、Slug (SNAI2) 和细胞角蛋白 14，并且雌激素受体、孕激素受体和 HER2（人表皮生长因子受体 2）的表达呈阴性。与同样源自 MMTV-PyMY 转基因 C57BL/6 雌性小鼠 (PubMed) 的分化程度更高、上皮样 CRL-3279、Py230 细胞相比，Py8119 细胞系表现出更未分化的表型，并且在细胞培养物中生长更积极。Py8119 细胞与 Py230 细胞是一对鼠乳腺细胞系，具有独特的间质 (Py8119) 或上皮样 (Py230) 特征，源自 C57BL/6 小鼠中 MMTV-PyMT 转基因诱导的乳腺肿瘤，可用于研究乳腺肿瘤发生。该细胞通过慢病毒转染的方式携带GFP基因。

细胞名称

PY8119+gfp(小鼠恶性乳腺癌细胞)

细胞别称

Py8119+gfp

细胞货号

HBCC17964

来源

成年小鼠；雌性；乳腺

细胞形态

间充质样

生长特性

贴壁生长

培养条件

F12K培养基；优质胎牛血清+5%；双抗+1%。

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、尽量吸干净T25瓶原培养基；
2、用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，吸走润洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml完培终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心3-5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

1、该细胞为构建好稳定转染GFP的细胞，随细胞传代次数的增加，其GFP荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。建议收到细胞后至少传3代，冻存留种后再进行筛选。

2、初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中，漂浮细胞大于60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约80%，可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药完全培养基正常培养。

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配（推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷）。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。