一、细胞简介

细胞简介

1970年G. Trempe 和 L.J. Old从胸水中建立了这株细胞。没有病毒颗粒。超微结构特征包括微丝和桥粒，肝糖原颗粒，大溶酶体，成束的细胞质纤丝。SK-BR-3细胞株过表达HER2/c-erb-2基因产物。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

细胞名称

SK-BR-3+luc 人乳腺腺癌细胞+luc

细胞别称

SK-Br-3+luc; Sk-Br-3+luc; SK BR 03+luc; SKBR-3+luc; SKBr-3+luc; SK-BR3+luc; SKBr3+luc; SkBr3+luc; SKBR3+luc

细胞货号

HBCC11520

来源

43岁；白人；女性；胸水

细胞形态

上皮细胞样

生长特性

贴壁生长

培养条件

McCOY's 5A培养基；优质胎牛血清+10%；双抗+1%。注意:该细胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。复苏初期细胞贴壁不牢，会有悬浮细胞出现，在传代和换液时注意回收（1000rpm 5min）悬浮的细胞。细胞生长融合到80%以后会有悬浮细胞出现。

培养环境

气相：空气，100%；二氧化碳，0%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法（注意收集）

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；
2、PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中，注意收集PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml完培终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心3-5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

注意事项:

(1) SK-BR-3细胞在复苏或传代后细胞需要24-48小时贴壁，细胞在培养48小时后再进行换液操作。

(2) 细胞系在复苏后第一周以及每次继代培养后都表现出贴壁细胞呈上皮样或圆形。圆形细胞松散地附着在一起。细胞在培养中每2-3天换液时将圆细胞离心收集再放回培养瓶中一起培养。

(3) 细胞胞体上有黑色颗粒并且分泌少量黑色颗粒是正常现象。

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配（推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷）。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。