一、细胞简介

细胞简介

主动脉瓣施半月瓣，位于左心室和主动脉之间，抑制射入主动脉的血液回流入左心室。主动脉瓣钙化可引起主动脉瓣狭窄关闭不全等，施导致老年退行性心瓣膜病的重要病理改变，其发病率随着年龄的增加而升高。有研究表明，瓣膜间质细胞向城固细胞样细胞表型转化有可能是主动脉瓣膜钙化的病理改变基础之一。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。‌

细胞名称

人主动脉瓣膜间质细胞永生化

细胞别称

Immortalization of human aortic valve interstitial cells

细胞货号

HBCC11597

来源

人；正常主动脉组织

细胞形态

长梭形、不规则细胞

生长特性

贴壁生长

鉴定报告

提供免疫荧光鉴定(波形蛋白 Vimentin 免疫荧光染色为阳性)

培养条件

推荐使用人主动脉瓣膜间质细胞永生化专用培养基（货号：HBCC15868）培养该细胞。

名称

体积

浓度

保存条件

人主动脉瓣膜间质细胞永生化基础培养基

500ml

1×

4℃、避光

人主动脉瓣膜间质细胞永生化培养添加剂

5ml

100×

-20℃、避光

胎牛血清（FBS）

50ml

终浓度10%

-20℃、避光

双抗（青霉素/链霉素，P/S）

5ml

100×

-20℃、避光

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL基础培养基（含10%FBS）的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、尽量吸干净T25瓶原培养基；
2、用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，吸走润洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml基础培养基（含10%FBS）终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

不同品牌胰酶消化时间差别较大，可根据细胞形态判断消化进程

四、细胞冻存方法

冻存液配方

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配（推荐使用DELF无血清非程序细胞冻存液HBCC16090进行冻存细胞，快速，便捷）。

冻存规格

按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

冻存方法

1、消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；
2、将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3、将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存;

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

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