一、细胞简介

细胞简介

该细胞来源于兔的正常巩膜组织。

巩膜是眼球壁的最外一层，由致密的胶原和弹力纤维构成，其结构坚韧，不透明。巩膜前缘接角膜缘，后方与视神经的硬膜鞘相延续。巩膜由外向内分为：巩膜上层；主质层；巩膜下层。其中上层是由上皮细胞构成。

细胞名称

兔原代巩膜上皮细胞

细胞别称

Rabbit scleral epithelial cells

细胞货号

HBCC11395

来源

兔；正常巩膜

细胞形态

铺路石样细胞

生长特性

贴壁生长

培养条件

推荐使用DELF原代上皮细胞专用培养基来培养该细胞。

名称

体积

浓度

保存条件

原代上皮细胞基础培养基

500ml

1×

4℃、避光

原代上皮细胞培养添加剂

5ml

100×

-20℃、避光

胎牛血清（FBS）

10mL

终浓度2%

-20℃、避光

双抗（青霉素/链霉素，P/S）

5ml

100×

-20℃、避光

培养环境

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

二、细胞复苏方法

复苏步骤

1、将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2、加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3、在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；
4、将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养；

三、细胞传代方法

传代比例

1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1、尽量吸干净T25瓶原培养基；
2、用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，吸走润洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、将培养瓶放入37度培养箱消化（1到2分钟，难消化的细胞适当增加时间）；
5、消化到细胞大部分变圆并脱落，轻敲培养瓶后加入3-4ml完培终止消化；
6、混匀细胞吸出，1000rpm离心3-5min，弃上清；补加1-2ml完培吹匀；
7、按1:2分配到新的培养瓶中，添加6-8ml完培保持细胞生长；

注意事项

不同品牌胰酶消化时间差别较大，可根据细胞形态判断消化进程

五、注意事项

注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3、本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。